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Dernière mise à jour : Mai 2018

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Unité Mixte de Recherche (INRAE – Université de Nantes) 1280

Electrophysiologie

Electrophysiologie
Techniques utilisés (principales) : Patch Clamp (simple et double patch clamp) sur tranche de cerveaux de rats/souris ou sur cellules

Responsable : Vincent Paille

Contact : vincent.paille@inrae.fr 

Mesure des propriétés membranaires des neurones 

- Propriétés passives: Ri, PM 

- Propriétés actives: AP threshold, Rheobase (pA), delay to the first spike, AP amplitude, AP duration, fAHP peak amplitude(mV), fAHP time to peak(ms), sAHP duration, AP rise/Ap decay 

- Analyse des trains de PA:  Initial firing rate (Hz), Final firing rate (Hz), SFA ratio (spike frequency adaptation, Courbe I/V

- Cell attached en voltage clamp : en solution Normal ou en Extracellulaire, pour étudier l’activité spontanée des neurones 

- Loose patch (Perkins+++) : Est plus adapté pour enregistrer des courant de Potentiels d’Action (en voltage clamp) 

Plasticité synaptique 

- STDP 1 Hz 100 x, pre post post pre (ref Fino…)

- STDP 1 Hz low stim (Ref fino, + Bi PNAS faible stim) 

- Drogues (APV, CNQX, LY…, Pirenzepine, Mibefradil, THL, AM251, iMK801 (bof), iBAPTA, iThapsigargin, iTHL, i… 

- Ratio NMDA/AMPA (-60, +40 ) 

- Ratio NMDA/AMPA, et analyse NMDA-NR2A ratio en utilisant l’ifenprodil en présence de CNQX et picro à + 40 mV (cf papier Rome) 

- NMDA/AMPA charge ratio en 0Mg2+ (intégrale des EPSCs) 

- Paired-pulse, permet de mettre en évidence la « short term plasticity », il s’agit de faire des doubles pulses répétés espacés de (chaque protocole est espacé de 10 secondes): 25, 50, 100, 250, 500, 1000, 2000, 10, 8, 6, 4, 2, 5000ms. Interprétation soit facilitation, soit dépression 

Appareillages

- Communication chimique (double patch-clamp) 

- Communication électrique (double patch-clamp) 

- Table anti-vibration avec cage de Faraday et compresseur d’air silencieux (TMC 1200x900x100)

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- Microscope (Olympus BX51wi) avec contraste interférentiel différentiel (DIC)

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- Extracteur capillaire en verre pour micropipette fin et longue (PC-10 puller – NARISHIGE) 

- Kit de micromanipulation (table de traduction, régulateur de température) Sutter Alcatraz 

- Amplificateur double patch-clamp (HEKA DOUBLE EPC10-USB) 

- Eclairage LED (CoolLED) pour la stimulation optogénétique 

- Système d’imagerie (infinity 3-3ur m/c 3mpx ccd 2/3" usb3.0 12-bit), sur station d’accueil dédiée avec un écran de 23 pouces 

- Vibratome Leïca VT1000S

Leica-VT1000-S-Vibrating-blade-microtome